| Dit project heeft tot doel om voor het werkzaamheidsonderzoek van tetanus (ToBi test) en difterie (verocel test) vaccins, na immunisatie van de proefdieren, de specifieke serum antistoffen in vitro te kwantificeren in één gecombineerde assay (ToBI) zodat de hands-on time aanzienlijk vermindert en de acceptatie- en implementatiegraad bij kwaliteitscontrole laboratoria voor serologische methoden uiteindelijk verhoogd wordt. Serologische modellen als alternatief voor letale challenge modellen voor werkzaamheidsonderzoek van difterie- (verocel test) en tetanus (toxine binding inhibitie (ToBI) test) vaccins berusten op een titratie van antistoffen, verkregen van geïmmuniseerde muizen, middels een in vitro methode. Deze serologische testen worden gescheiden uitgevoerd voor de twee vaccins. Omdat, voorbijgaand aan dierwelzijnsoverwegingen, hieraan weinig praktische voordelen zitten met betrekking tot hands-on time, blijven de klassieke challengetesten vaak gehandhaafd binnen vaccin kwaliteitscontrole laboratoria. Dit project beoogt om de ToBI test zodanig te modificeren dat een gecombineerde bepaling van difterie en tetanus antistoffen mogelijk zal zijn in een kortere periode waardoor de introductie van serologische modellen in kwaliteitscontrole laboratoria bijzonder aantrekkelijk wordt en inherent een reductie van het aantal proefdieren oplevert. Om dit doel te bereiken zullen difterie- en tetanus toxinen geconjugeerd worden met verschillende fluoroforen waarbij o.a. labelingsgraad, concentratie gelabeld toxine en eiwit/antigeen concentratie bepaald wordt. Vervolgens zal de gebruiksconcentratie van difterie en tetanus antistoffen en gelabelde toxinen, incubatietijden en temperaturen en instellingen afleesapparatuur geoptimaliseerd worden, waarna een kleinschalige validatie volgt. Hierbij wordt gekeken naar limit of detection, limit of quantification. Vervolgens zal een grootschalige in-house evaluatie plaatsvinden waarbij de gemodificeerde ToBI test naast de klassieke ToBI en verocel test zullen worden uitgevoerd voor het lopende werkzaamheidsonderzoek van tetanus en difterie vaccins. De onderzoeksresultaten zullen gepubliceerd en onder de aandacht gebracht worden van de Europese Farmacopee ter bevordering van de acceptatie en implementatie van serologische modellen. |
